POLYSCIENCES上海鼎桑代理
更新時(shí)間:2024-06-12
POLYSCIENCES上海鼎桑代理 美國POLYSCIENCES公司成立于1961年,主要生產(chǎn)和經(jīng)營(yíng)LIFE SCIENCES生命科學(xué)(膠體金,不含甲醛的甲醇等),病理學(xué)和顯鏡學(xué) 微球和粒子和磁珠各種單體和聚體等產(chǎn)品。polysciences公司是世界上zui大zui全的多聚化合物供應商,同時(shí)是世界*的免疫學(xué),組織化學(xué)試劑耗材供應商.
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產(chǎn)地 | 進(jìn)口 | 加工定制 | 否 |
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上海鼎桑生物科技有限公司一家專(zhuān)注于生命科學(xué)的科技企業(yè),由在國內科研試劑領(lǐng)域有著(zhù)豐富從業(yè)經(jīng)驗的技術(shù)團隊和管理團隊組建而成,專(zhuān)營(yíng)進(jìn)口生物試劑,科學(xué)儀器,實(shí)驗消耗品等。
公司將不斷把上優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品引入國內市場(chǎng),滿(mǎn)足客戶(hù)的需求,公司也將緊跟生命科學(xué)的發(fā)展,為廣大科研工作者探索生命科學(xué)的奧秘奉獻綿薄之力.
POLYSCIENCES上海鼎桑代理
POLYSCIENCES上海鼎桑代理
美國POLYSCIENCES公司成立于1961年,主要生產(chǎn)和經(jīng)營(yíng)LIFE SCIENCES生命科學(xué)(膠體金,不含甲醛的甲醇等),病理學(xué)和顯鏡學(xué) 微球和粒子和磁珠各種單體和聚體等產(chǎn)品。polysciences公司是世界上zui大zui全的23966上海鼎桑代理 多聚化合物供應商,同時(shí)是世界*的免疫學(xué),組織化學(xué)試劑耗材供應商.
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轉染試劑線(xiàn)性PEI溶液的配制(1mg/ml)
聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)是聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個(gè)碳個(gè)原子,即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò )在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”(proton sponge)體。PEI,可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。有實(shí)驗證明,分子量為25000的線(xiàn)性PEI即Polysciences 23966轉染效率zui高。
下面將主要介紹polysciences 線(xiàn)性PEI(#23966)的產(chǎn)品特性及其溶液的配制過(guò)程。
1. 產(chǎn)品特性:
產(chǎn)品名稱(chēng):線(xiàn)性聚乙烯亞胺(PEI)
CAS號 | 9002-98-6,26913-06-4 | 分子式 | (CH2CH2NH)n | 分子量 | 25000 |
熔點(diǎn) | 73-75°C | 外觀(guān) | 白色或黃色固體 | 結構式 |
|
溶解性 | 溶于熱水,低pH值的冷水,甲醇和乙醇;不溶于:苯,aether和丙酮 | 儲存 | 室溫 |
2. 溶液配制
此指導說(shuō)明書(shū)是經(jīng)polysciences公司研究,測試及其客戶(hù)反饋的后編寫(xiě)的。下面推薦一種簡(jiǎn)單適用而的方法,講述如何配制濃度為1mg/mL的轉染試劑的配制。
材料:
1g #23966、1L 純水(Milli-Q®純水,注射用水(WFI),或類(lèi)似的生物級水)、12 M鹽酸、10 M氫氧化鈉、一次性0.1-0.2µm PES真空無(wú)菌過(guò)濾器、無(wú)菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶。
器材:
1 L 玻璃燒杯、1 L玻璃量筒、核準pH計、2支1 mL塑料移液管、托盤(pán)、聚四氟乙烯(PTFE)攪拌棒、真空泵
配制過(guò)程:
1g #23966——900mL水溶解——攪拌、加熱(60-80°C)——加HCl調pH到2.0左右——蓋上燒杯,攪拌3h(直至粉末*溶解)——冷卻至室溫——加NaOH調pH到6.9-7.1——移液到量筒,加水補足至1L——真空過(guò)濾消毒——分裝,-20°C保存。
備注:加熱或加酸都有助于PEI溶解。當然酸可能不用加那么多,詳細用量可試加一點(diǎn)攪拌看看,足夠溶解就行,不一定需要加到pH那么低。
試劑儲存:
冷凍部分溶液可在-20°C保存長(cháng)達一年;部分解凍的溶液可在4°C保存2周,不可反復凍融。
粉末儲存:
未開(kāi)封的粉末有效期兩年。可在室溫下保存直至使用。
轉染操作流程:(瞬時(shí)轉染方法) 轉染效率(部分數據參考,本數據來(lái)源于網(wǎng)絡(luò ),不作為售后投訴依據)
1. 接種細胞: 轉染前一天,用膠原酶(WORTHINGTONG 公司 LS004196)消化細
胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個(gè)孔置
入的細胞量應能使轉染時(shí)細胞匯合度達到 70~80%。
2. 準備 DNA-PEI 復合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其
升至室溫。,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他適合的無(wú)蛋白培養基稀釋適
量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線(xiàn)性 PEI 轉
染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管,一邊將稀釋的線(xiàn)性 PEI 轉染試劑滴
加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以
形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時(shí),請用圓底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14
mL 離心管。
3. 轉染細胞: 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI 復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在
無(wú)血清條件下轉染時(shí),去除生長(cháng)培養基,替換成無(wú)血清培養基,然后滴 DNA-PEI 復
合物。轉染 3 h 后,添加½體積的包含 30%血清的生長(cháng)培養基。
4. 孵育細胞和分析結果: 在 CO2 培養箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉
染后快 的話(huà)7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合檢測時(shí)間。
細胞種類(lèi) 中文名稱(chēng) PEI 轉染效率
HEK293 人胚腎細胞 90%-95%
293-T 人胚腎細胞 90%-95%
CHO-K1 倉鼠卵巢細胞 80%-90%
U251 人源神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞 80%-90%
Hela 人源宮頸ai細胞 70%-80%
COS7 猴 SV40 轉化腎細胞 70%-80%
HepG2 人源肝癌細胞 70%-80%
NIH/3T3 小鼠胚胎成纖維細胞 60%-70%
膠質(zhì)瘤干細胞 人源膠質(zhì)瘤干細胞 60%-70%
Patu8988 人源胰腺癌細胞 60%-70%
U2OS 人源骨肉瘤細胞 60%-70%
轉染試劑和 DNA 配比數據
細胞型號 培養基 每孔細胞數 DNA 的量 轉染試劑量 和培養基混合 4-6h
293H DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
293FT DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
293E DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
293F DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
COS7 DMEM 1.5×10
4
0.4µg 0.5µL DMEM+10%FBS
hela DMEM 2×10
4
0.3µg 0.5µL 1640+15%FBS
Caco2 MEM 3.5×10
4
0.3µg 0.75µL MEM+10%FBS
BHK21 MEM 2×10
4
0.2µg 0.5µL MEM+10%FBS
CHO-DG44 DMEM+HT+pro 2×10
4
0.5µg 0.5µL DMEM+HT+pro +10%FBS
RAW264.7 DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM +10%FBS
MCF7
MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium
pyruvat
2×10
4
0.1µg 0.25µL
MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium
pyruvat+10%FBS
SW480 IMDM 3×10
4
0.4µg 0.5µL IMDM +10%FBS
MDCK DMEM 4×10
4
0.6µg 1µL DMEM+10%FBS
CHO-K1 IMDM+Pro 3×10
4
0.2µg 0.5µL IMDM+Pro +10%FBS
HepG2 DMEM 3×10
4
0.5µg 0.75µL DMEM+10%FBS
A549 DMEM 2×10
4
0.3µg 0.5µL DMEM+10%FBS
NIH/3T3 DMEM 1.5×10
4
0.1µg 0.75µL DMEM+10%FBS
vero DMEM 3×10
4
0.3µg 0.75µL DMEM+10%FBS
sf9 SIM SF 5×10
4
0.4µg 0.75µL SIM SF+10%FBS